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大鼠E鈣黏蛋白上皮鈣黏蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒實驗說明書
以下是天津本生關(guān)于大鼠E鈣黏蛋白/上皮鈣黏蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒的實驗說明書要點整理：
一、實驗原理
采用雙抗體夾心法：用純化的大鼠E-Cad抗體包被微孔板，依次加入樣本抗原和HRP標(biāo)記的抗體，形成復(fù)合物后通過TMB顯色，顏色深淺與樣本中E-Cad濃度正相關(guān)。
二、試劑盒組成
預(yù)包被抗體的96孔板
標(biāo)準(zhǔn)品(通常含400ng/ml凍干品，需用稀釋液重構(gòu))
生物素標(biāo)記檢測抗體、HRP標(biāo)記親和素
洗滌緩沖液(需蒸餾水稀釋)
TMB底物溶液及終止液
三、操作步驟
樣本準(zhǔn)備?
血清/血漿：離心去除顆粒，避免反復(fù)凍融。
組織勻漿：建議稀釋5,000倍后檢測。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?
按說明書梯度稀釋(如400→200→100→50→25→12.5→6.25 pg/ml)，空白孔用稀釋液作為0標(biāo)準(zhǔn)。
加樣與孵育?
每孔加50μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，再依次加入檢測抗體(100μL)，37℃孵育60分鐘。
洗板5次(手工洗板需拍干，避免交叉污染)。
顯色與終止?
每孔加底物A/B各50μL，避光反應(yīng)15分鐘。
加入終止液后15分鐘內(nèi)測450nm OD值。
四、注意事項
樣本處理?：溶血或脂血樣本需離心澄清;細(xì)菌污染可能導(dǎo)致假陽性。
實驗環(huán)境?：避免陽光直射，顯色后需避光。
質(zhì)量控制?：建議標(biāo)準(zhǔn)品和樣本做復(fù)孔，計算平均值。
保存條件?：開封后未用完板條需密封干燥保存;試劑長期不用需-20℃存放。
五、結(jié)果計算
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線，用四參數(shù)擬合方程計算樣本濃度。
六、技術(shù)參數(shù)
檢測范圍?：通常為6.25-400 pg/ml(不同品牌可能有差異)。
靈敏度?：<15 pg/ml。
特異性?：不與大鼠其他蛋白交叉反應(yīng)。
注：以上資料僅供參考，如需完整說明書，建議聯(lián)系供應(yīng)商獲取隨貨文件。
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